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生物体液荧光在位检测仪的设计
大多数生物样品都具有一定的光谱特性,检测及分析其光谱是研究生物特性的一个重要方面[1]。故出现了许多光学仪器,如各种波段的分光光度计、荧光光目前炼化1体化的石油化工传统发展模式面临着成品油需求不足和烯烃/芳烃供给不足的结构性矛盾度计、化学发光仪、原子吸收分光光度计等。但这些分析仪器都具有一个共同的特点,就是不能实现在位检测,它们必须先进行生物样品的取样、样品预处理,然后转置于各种分析仪器的样品池中,才能进行测量,这样操作麻烦,样品转来转去很容易受污染,导致测量误差。
本文介绍了一种光谱仪,它带有光纤探头,可直接插入生物体液中实现在位连续监测。由于荧光分析法具有灵敏度高,选择性强两大特点,特别适用于生物体液中各种成分的分析,故本仪器主要是检测荧光光谱,借助于计算机,可实时显示其光谱。通过对数据进行不同的处理,该光谱仪可以测量许多生物量。其测量灵敏度及精度都可以达紫外线到一般分析的要求。
2 仪 器 设 计
2.1 仪器结构框图
如图1所示,光源发出的光由透镜耦合进入探头,经入射光纤传输到探头顶端,与生物体液作用后,其信息光经出射光纤传至暗盒内,经准直色散后,其光谱增高鞋经狭缝由光电倍增管接收,倍增管输出的信号供计算机实时采集并显示。
2.2 探头设计
图1 仪器结构框图
触及塑料的再生
根据光纤探头的功能,即传输激发光并接收发射光,该光纤探头的形状必须设计成Y型,如图1中的光纤探头。
一般地,光纤形成光纤束时,其排列大致有三种:即随机分布型、同心圆型、半圆对称型[2],根据荧光发射是各向同性及三种光纤分布特点可知,这三种分布类型中,随机分布型光纤束接收荧光信息的能力较强。故开始选用了随机分布光纤束作为光纤探头,该探头的直径较粗,大约为5mm,其中包含光纤数目多,传输和接收光相对都比较强,可以插入试管中进行原理性测量。但随机分布型光纤探头存在缺点,即其探测灵敏度随反射面到探头端面的距离而变化。这一点可用图2说明。本实验石英光纤数值孔径为0.37,根据计算,入射角在0~21.7°范围内的光线能进入光纤并向前传播。根据光的可逆性,光的发散角范围也是0~21.7°。对于并排放置的入射光纤及出射光纤,其光线的发散角及接收角有一相交区域(图中阴影区),光通过入射光纤照到液体中激发荧光,只有图中阴影部分的荧光才能进入出射光纤并被传至信号接收器。从图中可以看出,反射面离光纤端面越近,即D越小,接收的荧光越少,在D=0时,接收的荧光信号为零,即被端面所淹没。在透明介质中,检测灵敏度随距离D的增大而增大。但在本文的实验中,由于液体是生物体液,特别是全血,对光的吸收很大,激发光及发射光仅能在血液中传播很短的距离。当探头插入全血中,探头端面附近的血液形成一系列反射面,越靠近探头端面的液层,其中的激发光越强,荧光也越强,但被出射光纤接收的荧光却越弱;而离探头越远的液层,其中的激发光经前面液层的吸收而变得很弱,故荧光也很弱,而且这些荧光传至出射光纤时又要被吸收掉一部分,故光纤探头所接收到的荧光很少,因而检测灵敏度不高。为了提高其灵敏度,实验中输入输出用同一根光纤,其集光本领显然得到提高。由于光是独立传播的,激发光及荧光在光纤内各自向前传播,互不干扰。图3是探头的原理图。其中1是单根粗石英光纤,2是匹配液,3是Y型石英光纤束,由7根细光纤组成。它们的数值孔径都是0.37。粗光纤的芯径与细光纤必须很好地匹配才能使检测灵敏度提高。具体算法:粗石英光纤的芯径是D,其截面积为πD2/4。细光纤的芯径d,7根细光纤的总面积为7πD2/4,由于7根细光纤不可能完全密合,各光纤间缝隙面积占总面积的0.28倍(该数据由南京玻纤院提供),7根光纤组成的光纤束的截面积为:1.28×7πd2/4。
图2 入出光纤的传光情况
船用电缆图3 入射出射共用一光纤的探头
图4 细光纤束的排列
若粗光纤芯径为0.6mm,则细光纤芯径必须为0.2mm,即7根芯径为0.2mm的细光纤刚好与芯径0.6mm的粗光纤匹配,计算如下:
粗光纤: 0.62×π/4=0.09πmm2,
7根细光纤:7×0.22×π/4
光纤束总面积:蛏子养殖1.28×7×0.22×π÷4=0.0896π0.09πmm2。
若粗光纤芯径为0.9mm,则细光纤必须为0.3mm才能互相匹配。见下面计算。
粗光纤截面积:0.92×π/4=0.2πmm,
7根细光纤截面积:7×0.32×π/4=0.157πmm2。
光纤束总截面积:1.28×0.157π=0.2另外πmm2。
本实验中采用了后一种配置,即7根0.3mm的细光纤与芯径0.9mm的粗光纤相耦合,它们中间涂一层折射率与石英相近的匹配液,以消除两光纤接触面的反射。7根细光纤的
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